考马斯亮蓝染色实验报告，考马斯亮蓝染色法测定蛋白质

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可溶性蛋白质是指能够以小分子形式溶解于水或其他溶剂中的蛋白质。它通常用作植物生理学、微生物学和食品加工等实验中的重要指标。例如，可溶性蛋白质是植物耐旱性的重要指标之一。今天百汇生物给大家分享一种考马斯亮蓝染色法测定植物中可溶性蛋白的方法。

1 试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯1.1 考马斯亮蓝溶液的制备：称取100 mg 考马斯亮蓝，溶于50 ml 90%乙醇中，再溶于100 ml 85%（W/V） ）加磷酸，用蒸馏水定容至1L，过滤过夜，保存于琥珀色瓶中，室温可保存1个月。 1.2 90%乙醇1.3 100 g/ml 牛血清白蛋白（BSA）标准溶液：称取10 mg BSA，定容至100 ml，量取100 g/ml 或25 mg BSA，加蒸馏水溶解，定容至100 ml，除去蒸馏水40 ml。 1.4 0.05 mol/L pH7.8 的制备磷酸：母液、0.2 mol/L 磷酸二氢钠溶液：取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）35.85 g，加入蒸馏水中，用母液B、0.2 mol/L 磷酸二氢钠稀释至500 ml溶液：取1.5601克NaH2PO4·2H2O（分子量156.01），用蒸馏水稀释至50毫升。05M pH 7.8磷酸：取228.75毫升母液A，用蒸馏水将21.25毫升母液B稀释至1000毫升。

《2 主要设备：1：10000分析天平、紫外可见分光光度计、离心机》

3 样品制备：取风干的待测实验室样品，充分混匀，所有颗粒过直径0.25毫米的筛子（吸管过0.5毫米）备用，置于样品瓶中备用。这个目的。”

4 分析步骤4.1 样品溶液的制备样品提取：取新鲜样品0.2~0.5 g，用蒸馏水或缓冲液匀浆，3000 r/min~4000 r/min 离心10 min，提取上清液备用。 4.2 标准曲线的制作取6 个带塞试管，依次加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml 标准溶液，加蒸馏水定容至1 ml，再加入5 ml将考马斯亮蓝试剂加入每个试管中，等待1分钟，使用0号试管约5分钟，在595 nm处测量比色吸光度作为空白对照，横轴为蛋白质含量，横轴为吸光度。以纵轴绘制校准曲线4.3 样品定量：取1.0 ml样品提取物（根据蛋白质含量适当稀释）放入试管中（每个样品重复两次）和考马斯亮蓝试剂5 ml，摇匀，等待2分钟待反应完全后，在595 nm处测定颜色，测定吸光度，通过标准曲线检查蛋白质含量。

“5个结果的计算”

式中：C——标准曲线确定值（g）；Vt——提取液总体积（ml）；WF——样品鲜重（g）；Vs——测量时加入样品体积（ml）必须保留三位小数。

来源：成都百汇生物编辑

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